本文標(biāo)題："沉淀物凝膠的孔徑微觀計(jì)量圖像顯微鏡技術(shù)"
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沉淀物凝膠的孔徑微觀計(jì)量圖像顯微鏡技術(shù)
凝膠的孔徑范圍和分子篩性質(zhì)可以簡單地通過控制單體和交聯(lián)劑的
濃度而得到。比如在7．5％膠濃度(單體和二聚體的總和)中，單體與交
聯(lián)劑濃度之比為95：5時，將得到5nm大小孔徑。而在相同比例下，膠濃
度為30％時，孔徑為2nm。如果控制單體與二聚體的比例，甚至還可以
控制用于蛋白質(zhì)分離的特定孔徑。
由于在設(shè)計(jì)聚丙烯酰胺介質(zhì)特性時具有很好的靈活性，使得這種介
質(zhì)電泳成為分析蛋白質(zhì)的非常有力的工具。與色譜技術(shù)不同的是電泳中
的凝膠不呈粒狀，而是一種取決：尸模子(平板或柱狀)形狀的連續(xù)體系
。實(shí)際上凝膠聚合物分子呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，由緩沖液包圍著，并且網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)
框架中的一些“孔”亦由緩沖液填充。當(dāng)在兩極間外加電壓時，蛋白質(zhì)
分子與緩沖液中的陰陽離子分別向合適的電極移動。在移動過程中有摩
擦存在，摩擦力的大小與凝膠孔徑大小及帶電粒子的半徑相關(guān)，這意味
著除了凈電荷及質(zhì)量影響外，分子篩效應(yīng)也影響蛋白質(zhì)的分離效果。
一旦蛋白質(zhì)顯著分離，凝膠即從系統(tǒng)中取出，這時有必要采用高氯
酸或三氯醋酸將蛋白質(zhì)沉淀來固定蛋白(Mackie，1980，1990；Laird等
，1982)。然后，采用合適的染料對膠進(jìn)行染色以使這些被固定的蛋白
能被觀察到(通常染色劑采用溶于乙醇、乙酸和水混合溶劑中的考馬斯
亮藍(lán)，上述溶劑比例是25：8：67)。染色結(jié)束后，采用同樣溶劑洗滌凝
膠，將未被結(jié)合的染料洗去，使蛋白呈現(xiàn)藍(lán)色帶狀(如在清水背景下可
呈現(xiàn)蛋白質(zhì)分離輪廓)。所有采用凝膠作為支持介質(zhì)的電泳體系都需要
固定和染色步驟，因?yàn)槟軡M足電泳要求的蛋白質(zhì)必須是水溶性的并且能
很好地被固定和觀察，因此它們必須首先采用沉淀法從溶液中分離出來
，然后采用合適的染色步驟以便被觀察到(Rehbein等，1995)，隨后對
膠的檢查可以目測或采用光密度計(jì)或圖像分析儀測量蛋白質(zhì)在分離圖譜
中的位置及濃度。
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